Markierungsverfahren von Proteinen mit kleinen Fluorophoren

Es gibt viele Hinweise, dass G-Protein-gekoppelte Rezeptoren bei ihrer Aktivierung durch einen Agonisten ligandenselektive Konformationen eingehen. In dieser Arbeit wurde ein Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET)-basierter Ansatz gewählt, um ligandenselektive Konformationen in der dritten intrazellulären Schleife des 2a-adrenergen Rezeptors (2a-AR) in lebenden Zellen darzustellen. Dazu wurden Rezeptorsensoren erstellt, welche jeweils ein CFP am Ende des C-Terminus trugen und in der dritten intrazellulären Schleife an verschiedenen Stellen mit einem Tetracysteinmotiv versehen wurden. Durch das Tetracysteinmotiv ist es möglich, den Rezeptor spezifisch mit dem niedermolekularen Fluorophor FlAsH (fluorescein arsenical hairpin binder) zu markieren, welcher als Akzeptor für den Donor CFP in FRET-Experimenten dient. Die Untersuchungen zur Rezeptorbewegung im ersten Teil dieser Arbeit wurde mit dem kleinen Fluorophor FlAsH in Kombination mit einer großen GFP-Variante durchgeführt. Im zweiten Teil dieser Arbeit wurde eine Methode entwickelt, bei der es möglich ist Proteine spezifisch mit beiden kleinen Fluorophoren FlAsH und ReAsH in einer lebenden Zelle zu markieren.

Autorentext

Dr.rer.nat. Alexander Steffen Maria Zürn, geboren 29.06.1980 inWürzburg. 1999 Abitur Gymnasium Dinkelsbühl. 2001-2006 Studim der Pharmazie, Uni Würzburg, 2006 Approbation zumApotheker. 2006-2009 Promotion Pharmakologie Würzburg (AG Lohse).2009-2010 Postdoc Pharmakologie Würzburg. 2010-2011 Postdoc ander UC Berkeley.