DNA-Extraktion aus Schneckenepithelgewebe

Das Ziel der Forschung war es, drei Protokolle zu vergleichen: Extraktion mit SDS; Extraktion mit CTAB und 2beta-Mercaptoethanol und Extraktion mit SDS und Proteinase K, um die am besten geeignete Methode zur Gewinnung von DNA mit hohem Molekulargewicht und hoher Reinheit in Schneckenepithelgewebe zu bestimmen: Arion subfuscus und Deroceras reticulatum. DNA-Konzentration und -Reinheit wurden spektrophotometrisch bestimmt (Absorption bei 260 nm und Verhältnis Abs260/Abs280 nm). Es wurde ein vollständig randomisiertes Design mit sechs Wiederholungen verwendet. Signifikante Unterschiede (p<0,01) wurden für Menge, Konzentration und Reinheit zwischen den Protokollen festgestellt. Mit dem Protokoll (SDS und Proteinase K) konnte DNA mit höherem Molekulargewicht (2 514,90±291,56) und höherer Reinheit (1,97±0,02) gewonnen werden. Die Qualität der DNA der einzelnen Protokolle wurde mittels PCR-RAPD verifiziert, wobei für den OPA-02-Primer (SDS-Protokoll) eine geringe Reproduzierbarkeit beobachtet wurde, während bei den anderen Methoden hochauflösende Amplifikationsprofile und reproduzierbare Banden beobachtet wurden. Es wird empfohlen, das SDS-Protokoll und Proteinase K zu verwenden, um genomische DNA mit hohem Molekulargewicht, Qualität und Reinheit in Schnecken zu erhalten.

Autorentext

Dr. Luis Angulo Graterol. Biólogo, M.Sc. Mejoramiento de Plantas. Jefe Laboratorio de Genética Molecular.Profesor e Investigador del Departamento e Instituto de Genética, Facultad de Agronomía, Universidad Central de Venezuela. Autores:Guillermo Antonio Perichi Cabrera, MSc.Rosana Figueroa Ruíz, Ph.D.Luis Dinitri Castro Chacín, Lcdo.