Isolement et caractérisation d'un promoteur du gène de la copalyl diphosphate synthase

Le présent travail porte sur le clonage du promoteur et l'identification in silico des éléments cis-actifs localisés dans le gène de la copalyl diphosphate synthase (CPS) de Salvia miltiorrhiza. Cette plante présente un intérêt médical en raison de son activité biologique significative, qui dépend de composés terpénoïdes appelés tanshinones. Les voies métaboliques de la biosynthèse des tanshinones n'étant pas entièrement élucidées, nous avons décidé de déchiffrer l'aspect inconnu de la régulation transcriptionnelle de la CPS, enzyme d'une importance cruciale pour la biosynthèse des tanshinones. Nous avons identifié de nombreux motifs cis-actifs, ainsi que des facteurs trans homologues potentiellement actifs dans la régulation du gène CPS de S. miltiorrhiza. L'analyse des gènes des facteurs trans co-exprimés avec le CPS d'A. thaliana et leur comparaison avec les facteurs trans identifiés par les recherches in silico du promoteur CPS de S. miltiorrhiza n'ont révélé aucune protéine commune. Afin de valider expérimentalement les résultats des recherches in silico, l'influence de l'auxine, de la gibbérelline, de l'acide salicylique et d'une concentration élevée en sel sur l'activité du promoteur a été évaluée : l'expression du gène gus a été mesurée 0, 12, 24, 48, 72 et 96 heures après le traitement hormonal, ou pendant une exposition de 96 heures à 100 mM de NaCl.

Autorentext

Piotr Szymczyk, docteur en philosophie, chef du département de biotechnologie pharmaceutique, faculté de pharmacie, université de médecine de ód (Pologne). Doctorat décerné par l'université de ód .

Klappentext

Le présent travail porte sur le clonage du promoteur et l'identification in silico des éléments cis-actifs localisés dans le gène de la copalyl diphosphate synthase (CPS) de Salvia miltiorrhiza. Cette plante présente un intérêt médical en raison de son activité biologique significative, qui dépend de composés terpénoïdes appelés tanshinones. Les voies métaboliques de la biosynthèse des tanshinones n'étant pas entièrement élucidées, nous avons décidé de déchiffrer l'aspect inconnu de la régulation transcriptionnelle de la CPS, enzyme d'une importance cruciale pour la biosynthèse des tanshinones. Nous avons identifié de nombreux motifs cis-actifs, ainsi que des facteurs trans homologues potentiellement actifs dans la régulation du gène CPS de S. miltiorrhiza. L'analyse des gènes des facteurs trans co-exprimés avec le CPS d'A. thaliana et leur comparaison avec les facteurs trans identifiés par les recherches in silico du promoteur CPS de S. miltiorrhiza n'ont révélé aucune protéine commune. Afin de valider expérimentalement les résultats des recherches in silico, l'influence de l'auxine, de la gibbérelline, de l'acide salicylique et d'une concentration élevée en sel sur l'activité du promoteur a été évaluée : l'expression du gène gus a été mesurée 0, 12, 24, 48, 72 et 96 heures après le traitement hormonal, ou pendant une exposition de 96 heures à 100 mM de NaCl.