Reinigung von Superoxiddismutase aus einem Bakterienisolat

Die Zellen wurden durch Zentrifugation aus dem bakteriellen Kulturisolat gewonnen und in Tris-HCl-Puffer mit pH 8,0 suspendiert. Die optische Dichte (O.D.) der Zellen wurde bei 600 nm gemessen, und jedes Mal wurden Zellen mit einer optischen Dichte von 21,5 (O.D.) aufgebrochen und für die Reinigung des Enzyms verwendet.Reinigung der Superoxid-Dismutase aus SPB-13.DieAmmoniumsulfat-Fällungsmethode wurde für die Konzentration der Proteine verwendet.Danach wurde das Enzym mit einer DEAE-Sepharose-Säule weiter gereinigt. Die DEAE-Sepharose-Säule wurde mit 3 ml des konzentrierten Proteins beladen.Die Enzymaktivität wurde nur in den Fraktionen 22, 23, 24, 25, 26, 27 und 28 erfasst. Diese Fraktionen wurden zusammen gepolt. Die gepollerten Fraktionen wurden zusammen mit dem rohen Enzym durch SDS-PAGE auf ihre Reinheit überprüft.Die maximale Aktivität der Superoxiddismutase von SPB-13 wurde in Tris-HCl-Puffer, 60mM Molarität, pH 8,0, bei einer Inkubationszeit von 2,0 Minuten und einer Inkubationstemperatur von 450C festgestellt. Eine Enzymkonzentration von 10 µg erwies sich als optimal. Die Thermostabilität der Superoxiddismutase wurde überprüft, und das Enzym erwies sich 60 Minuten lang bei bis zu550 °Cals thermostabil.

Autorentext

Dr. Vivek Sharma, viveksharma.biotech@gmail.com EDUCATION Ph.D. in Microbial Biotechnology, 2019 - Panjab University Chandigarh, Indien, Dissertation: Isolierung und Reinigung von Postbiotika.